| Objectif
de la manipulation |
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Mettre en évidence l'existence d'un potentiel de
membrane en mesurant, à l'aide de deux électrodes, l'une externe,
l'autre interne, cette différence de potentiel entre les deux faces
de la membrane plasmique qui entoure le jaune d'un oeuf de poule.
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| Principe
de la manipulation |
- Enregistrer par EXAO la différence de potentiel qui apparaît dès
qu'une électrode pénètre dans le jaune d'oeuf, la seconde
électrode restant à l'extérieur.
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| Matériel
et montage |
- Matériel EXAO : interface Nortek et logiciel Winbio.
- Une vieille loupe binoculaire dont les optiques ont été enlevées
et remplacées par deux bouchons perforés portant les électrodes. La
crémaillère de la loupe binoculaire permet le mouvement des
électrodes au moment de la pénétration dans le jaune d'oeuf. Les
trous des valets permettent de fixer une fiche de mise à la terre.
- Deux électrodes réalisées à l'aide de fil téléphonique (50 cm)
dont une extrémité à été dénudée sur quelques centimètres ;
l'autre extrémité est reliée à la borne A (+) ou B (-) de l'ampli
2 de l'interface. Deux gaines de stylos feutres permettent de
rigidifier les électrodes qui traversent les deux bouchons percés de
la loupe binoculaire ; le fil est collé dans la gaine du stylo à
chaque extrémité (colle pour plastique), seule la partie dénudée
dépasse de la pointe de la gaine.
Electrode externe : faire une boucle avec la partie dénudée du fil
pour qu'il puisse prendre appui sur le jaune d'oeuf sans le crever. Elle
sera reliée à la borne B de l'ampli 2.
Electrode interne : la partie dénudée (environ 1 cm) sera en un
premier temps à la surface du jaune puis devra y pénétrer jusqu'à la
base de la gaine qui servira d'isolant vis à vis du blanc d'oeuf. Elle
sera reliée à la borne A de l'ampli 2.
Le montage obtenu est analogue à celui d'une microélectrode interne
reliée à la plaque supérieure d'un oscilloscope.
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Matériel biologique : un oeuf de poule, à température
ambiante, cassé dans un bécher de 50 mL de forme haute. Ne conserver que
la quantité de blanc nécessaire pour couvrir le jaune qui doit toucher le
fond du bécher afin d'éviter son enfoncement lors du mouvement des
électrodes.
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Visualiser le montage
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| Protocole |
- Lancer Winbio
/ Choisir une manipulation / Choix de la manipulation / Phénomènes
lents. Attendre la fin du chargement du logiciel de l'interface.
- Choisir les conditions de la mesure : Mesure / Mesure ampli 2. Ajuster
verticalement l'échelle à la taille de l'écran.
- Vérifier que le bouton poussoir de l'interface est en position MANU.
- Choisir les échelles :
- Echelle de temps : 0 à 1 min
- Echelle de tension = échelle ampli 2 : - 100 à +
25 mV
- Amener les deux électrodes à la surface du jaune d'oeuf.
- Lancer une mesure (Exécution / Lancer la mesure) et bien amener le
graphe à 0 à l'aide du bouton DECALAGE CONTINU de l'interface ; arrêter
la mesure (double clic droit) ; lancer à nouveau la mesure.
- Au bout d'une vingtaine de secondes, faire pénétrer l'électrode
interne dans le jaune d'oeuf en tournant d'un coup sec la vis de mise
au point de la loupe binoculaire.
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| Résultats |
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| Difficultés |
- Elles peuvent être dues à la présence de parasites qui perturbent
l'enregistrement. Dans ce cas, éloigner au maximum le dispositif
d'enregistrement et l'interface des ordinateurs. Il suffit souvent de
tenir à la main le bécher contenant l'oeuf pour que les parasites
disparaissent. On peut aussi disposer à l'arrière et sous le bécher
une feuille d'aluminium type "albal". La mise à la terre du
support des électrodes est indispensable.
- Si l'électrode interne déchire la membrane, le potentiel
enregistré peut s'atténuer rapidement : il faut coller
minutieusement le fil de cuivre à l'extrémité de l'étui
plastique et empêcher les bavures de colle.
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| Obligations |
- Utiliser un oeuf le plus frais possible pour une bonne
amplitude du potentiel de membrane et le porter à température
ambiante avant la mesure.
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| Remarques |
- L'électrode
interne peut aussi être fabriquée à l'aide de fil téléphonique et
d'une pipette Pasteur : on chauffe l'extrémité de la pipette de manière
à ce qu'elle se soude à la partie dénudée du fil qui dépasse
d'environ 1 cm. Une telle électrode est toutefois plus fragile.
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